Ingeniería de proteasas y enzimas

1. Ingeniería de proteínas: basada en el estudio de la relación entre la estructura y la función de las proteínas, el uso de la tecnología de ingeniería genética o la tecnología de modificación química para transformar las proteínas existentes en nuevas proteínas de la biotecnología moderna.
2. Ingeniería enzimática: el uso de enzimas, orgánulos o funciones catalíticas específicas de las células, a través de la producción industrializada en reactores apropiados de productos humanos o para lograr un propósito particular de una ciencia técnica.
3. Los principales contenidos de la investigación en ingeniería enzimática: 1) ingeniería enzimática química 2) ingeniería enzimática biológica 3) enzimas y células inmovilizadas 4) reactores y sensores enzimáticos 5) catálisis de enzimas en fase no acuosa
4. Fusión de proteínas: recombinación de parte del gen que codifica una proteína con otro gen de proteína, o combinación de fragmentos de diferentes genes de proteínas para producir nuevas proteínas de fusión mediante la clonación y expresión génica.
5. El papel de la fusión de proteínas: 1) para el aislamiento y purificación del producto de expresión; 2) para mejorar la solubilidad del producto de expresión; 3) para mejorar la estabilidad de la proteína.
6. Cristalografía de proteínas: la ingeniería del estudio estructural de macromoléculas biológicas mediante tecnología de difracción de rayos X, una parte importante de la biología estructural.
8. mutación dirigida: la secuencia de nucleótidos local de un gen específico se altera de manera dirigida mediante la clonación molecular, que se suele utilizar para estudiar la estructura funcional de las proteínas, así como para la modificación de proteínas diana.
10. Ámbito de investigación de la ingeniería enzimática:
1) Desarrollo y producción de diversos tipos de enzimas naturales;
2) Técnicas de aislamiento, purificación e identificación de enzimas;
3) Técnicas de inmovilización;
4) Polinización cruzada utilizando otros campos de la biotecnología;
5) desarrollo y aplicación de reactores multienzimáticos.
11. Estabilidad y estabilización de enzimas:
(i) Causas de la inactivación enzimática:
(1) Algunos residuos de aminoácidos específicos en el centro activo de la enzima se modifican químicamente, de modo que se pierde la actividad enzimática (microscópica);
(2) Influencia del entorno externo, barreras espaciales en el centro activo de la enzima, de modo que no puede unirse al sustrato;
3) cambios en la estructura superior de la enzima (cambios en la hélice y el plegamiento);
4) rotura de la cadena polipeptídica (muy fuerte);
(ii) Estabilización de la enzima:
(1) conservación a baja temperatura (la enzima en sí no se desnaturaliza, no es fácil que otras enzimas degraden la proteína diana);
2) Adición de sales (alta concentración de (NH4)2SO4);
3) Adición de ligandos como coenzimas de sustrato;
4) adición de desnaturalizantes fuertes (para proteger la estructura primaria y reactivarla cuando se utiliza);
5) cristalización.
12. Superioridad de los microorganismos como fuentes de enzimas:
1) Fácil acceso a las enzimas necesarias para las enzimas;
2) fácil acceso a cepas de alto rendimiento;
3) ciclo de producción corto;
4) bajo coste de producción;
5) fácil gestión de la producción;
6) Más formas de mejorar la producción de enzimas microbianas.

13. Enzima inmovilizada: Se refiere a la enzima que existe en un determinado espacio en estado bloqueado, que puede llevar a cabo la reacción de forma continua, y la enzima puede recuperarse y reutilizarse después de la reacción.
14. Ventajas de la enzima inmovilizada:
1) Es extremadamente fácil separar la enzima inmovilizada del producto y del sustrato;
2) Puede realizar reacciones por lotes repetidas y columnas cargadas en una reacción continua durante un largo período de tiempo;
3) la capacidad de aumentar la estabilidad de la enzima en la mayoría de los casos;
4) el proceso de reacción de la enzima puede controlarse estrictamente;
5) No hay residuos de enzima en la solución del producto, lo que simplifica el proceso de purificación;
6) Es más adecuado para la reacción multienzimática que la enzima libre;
7) el rendimiento del producto puede aumentarse y la calidad del producto puede mejorarse; 8) la eficiencia del uso de la enzima mejora y el coste se reduce.
15. Desventajas de la enzima inmovilizada:
1) Hay una pérdida de actividad enzimática cuando se inmoviliza;
2) Aumento del coste de producción y gran inversión inicial en la planta;
3) solo puede utilizarse para sustratos solubles y es más adecuada para sustratos de moléculas pequeñas;
4) No es adecuado para reacciones multienzimáticas en comparación con el bacteriófago intacto, especialmente aquellas que requieren cofactores;
5) Los procedimientos de separación a los que deben someterse las enzimas intracelulares.
16. Principios de preparación de enzimas inmovilizadas:
1) Se debe tener cuidado para mantener la actividad catalítica y la especificidad de la enzima;
2) La inmovilización debe favorecer la automatización y la continuidad de la producción;
(3) La enzima inmovilizada debe tener la menor resistencia espacial posible al sitio, para no obstaculizar la proximidad del carbón y el sustrato, con el fin de mejorar el rendimiento del producto;
(4) La enzima y el portador deben tener una fuerte fuerza de unión para que la enzima inmovilizada pueda recuperarse y el almacenamiento facilite su uso repetido;
(5) La enzima inmovilizada debe tener la máxima estabilidad, y el portador seleccionado no debe reaccionar químicamente con el producto de desecho o la solución de reacción;
(6) El coste de la enzima inmovilizada debe ser bajo, propicio para el uso industrial.
17. Métodos de inmovilización de enzimas:
(i) Método de unión no covalente:
(1) Método de cristalización: aplicable a enzimas con baja actividad enzimática, la concentración cambia después de la cristalización y no hay pérdida en el uso continuo constante;
(2) método de descomposición: la enzima se convierte en un polvo seco, que se dispersa en la fase insoluble en agua, incluso si el polvo seco se suspende en el disolvente, ventaja: la recuperación es más conveniente, desventaja: el polvo seco es fácil de absorber agua, las partículas se hacen más grandes, la actividad se reduce y la vitalidad de la enzima en disolventes orgánicos se verá afectada;
(3) Adsorción física: método en el que la enzima se adsorbe físicamente en un portador insoluble; Ventaja: el centro activo de la enzima no se destruye fácilmente, hay menos cambios en la estructura superior, hay menos pérdida de actividad enzimática, también es adecuado para células inmovilizadas; Desventaja: interacción débil entre la enzima y el portador, la enzima se desprende con facilidad;
(4) Unión al portador soluble en agua mediante enlace iónico; Ventajas: operación simple, condiciones suaves, la estructura mayor y el centro activo no pueden destruirse, también aplicable a células inmovilizadas; Desventajas: la fuerza de unión del portador y la enzima es más débil, tampón aniónico o catiónico, la concentración iónica de la influencia de la mayor, la enzima es más propensa a desprenderse del portador;
(ii) Método de unión química:
(1) método de unión covalente: la unión covalente de la enzima y el portador; método: la activación del gen relacionado con el portador, y luego la reacción de acoplamiento con los genes relacionados con la enzima, en la unión del portador es relativamente fuerte, generalmente no se fijarán los cambios de concentración del sustrato y el cambio; desventajas: las condiciones de reacción son más intensas, a menudo conducen a cambios en la estructura de alto nivel, destrucción del centro activo, solo es aplicable a la inmovilización de la enzima, no es adecuado para la inmovilización de la célula;
(2) Método de reticulación: sobre el uso de reactivos multifuncionales o reactivos bifuncionales, de modo que la enzima y la enzima o los microorganismos y las células microbianas reticulan el método de inmovilización, generalmente reduciendo la concentración del agente reticulante y el tiempo de reacción para mantener la actividad enzimática;
(iii) Método de incrustación:
(1) tipo de rejilla: la enzima o los microorganismos incrustados en una fina rejilla de gel polimérico, este método es la inmovilización de células microbianas con más métodos; Ventajas: no es necesario combinarlo con la reacción de la proteína enzimática, la tasa de recuperación de la actividad enzimática es alta;
(2) Tipo de microcápsula: la molécula de la enzima está encapsulada en una cápsula, la membrana polimérica es semipermeable, esta cápsula es impermeable y puede existir en alguna fase orgánica anhidra.
18. Propiedades de las enzimas inmovilizadas:
(i) Cambio en la actividad enzimática después de la inmovilización:
Causas: 1) La conformación espacial de la molécula enzimática cambia durante la inmovilización, afectando incluso a los aminoácidos en el centro activo;
La libertad espacial de la molécula de la enzima se restringe después de la inmovilización, lo que afecta directamente al efecto vacuolar del centro activo sobre el sustrato;
La resistencia a la difusión interna hace que las moléculas del sustrato se resistan a acercarse al centro activo;
Cuando se incrusta, la enzima queda rodeada por una membrana semipermeable de polímero, y el sustrato macromolecular no puede acercarse a la enzima a través de la membrana;
Efecto de la inmovilización sobre la estabilidad de la enzima:
Aumenta la estabilidad térmica;
2) Aumento de la estabilidad frente a diversos reactivos orgánicos y reactivos enzimáticos;
(3) Estabilidad frente a diferentes valores de pH, la estabilidad de la proteasa, la estabilidad de almacenamiento y la estabilidad operativa tienen un impacto;
(4) Las razones del aumento de la estabilidad de la enzima inmovilizada: la enzima inmovilizada y el portador pueden conectarse en múltiples puntos, lo que puede evitar que la molécula de proteasa se estire y se deforme; la vitalidad de la enzima puede aliviarse después de la inmovilización y liberarse; la autodegradación de la enzima puede inhibirse;
(iii) La temperatura óptima cambia —- aumenta;
(iv) Cambio óptimo de pH: el rango se amplía;
(v) Cambio en Km (cambio en la constante de Mie —- se hace más pequeño, la afinidad aumenta).
19. Métodos de inmovilización:
1) La co-inmovilización de la coenzima y la enzima en el mismo portador da como resultado un sistema que está permanentemente libre de coenzima adicional;
2) inmovilizar la coenzima directamente sobre la molécula de enzima.
20. Inmovilización celular: células que no pueden moverse libremente, es decir, células que están restringidas o limitadas a ciertos límites espaciales por factores físicos, químicos y de otro tipo, pero que aún conservan actividad catalítica y tienen viabilidad para ser utilizadas de forma repetida y continua.
1. Ventajas y desventajas de la inmovilización celular:
Ventajas: 1) Las células inmovilizadas mantienen el estado original y el entorno natural del sistema enzimático intracelular, por lo que son más estables;
Mantienen el sistema multienzimático original en la célula, por lo que la ventaja catalítica de múltiples pasos es más evidente, no necesitan regeneración de coenzimas;
Ventajas más evidentes para la fermentación de células proliferantes inmovilizadas; alta densidad de células inmovilizadas, pueden proliferar, acortar el ciclo de producción de fermentación; buena estabilidad de fermentación, puede repetirse durante un período de tiempo más largo para uso continuo; el caldo de fermentación contiene menos organismos, lo que favorece el aislamiento y la purificación del producto para mejorar su calidad;
Desventajas: 1) La presencia de una variedad de enzimas en la célula formará subproductos no deseados;
La presencia de membranas celulares, paredes celulares y también portadores puede formar una limitación de difusión;
3) el tamaño de los poros formados por el portador afecta a la permeabilidad del sustrato polimérico.
2. Modificación química: cuando la estructura covalente de una proteína se altera por la inclusión o eliminación de un gen químico, nos referimos a este fenómeno como modificación química.
3. Factores que afectan a la reactividad del grupo funcional de las proteínas: 1) polaridad de las microrregiones; 2) efecto de enlace de hidrógeno; 3) efecto electrostático; 4) efecto de bloqueo de sitio.
4. Hiperreactividad a nivel funcional de la proteína enzimática: se refiere a un gen de cadena lateral de la proteína y a que los reactivos individuales pueden producir una reacción rápida.
5. Factores que afectan a la hiperreactividad: 1) alteración del valor pK de la función proteica; 2) mayor reactividad del grupo funcional de la proteína; 3) atracción del reactivo por interacciones electrostáticas y orientación adecuada; 4) adaptaciones estereoquímicas entre el reactivo y las regiones proteicas cercanas al sitio de modificación.
6. Determinantes de la reactividad del modificador: 1) adsorción selectiva; 2) interacciones electrostáticas; 3) factores de bloqueo de sitios; 4) factores catalíticos; 5) polaridad de microrregión (polaridad del entorno local).
7. Control de la especificidad de la reacción de modificación:
(i) Selección de reactivos:
(1) Existen varios casos de modificación de aminoácidos:
a. Modificación de todos los grupos amino sin modificar otros genes;
b. Modificación del grupo alfa amino por contramodificación;
c. modificación del grupo amino con actividad catalítica; d. cambiar el estado de carga y la solubilidad de las proteínas, cambiar el estado de carga de las proteínas para elegir reactivos que puedan transportar la carga máxima en condiciones neutras, cambiar la solubilidad de las proteínas la reacción se lleva a cabo en agua, la elección de reactivos químicos para los solubles en agua; 3) determinación cuantitativa del producto de reacción; 4) consideración del tamaño del reactivo: la elección del tamaño del reactivo es menor para facilitar la modificación, sin causar grandes cambios en la conformación de la proteína;
Selección de las condiciones de reacción:
Las condiciones de reacción no causarán la desnaturalización irreversible de la proteína;
La elección de las condiciones de reacción es propicia para la modificación específica de las proteínas;
(iii) especificidad de la reacción: 1) puede utilizar la especificidad de algunos genes en la proteína; 2) elegir diferentes pH de reacción; 3) utilizar cierta inestabilidad del producto; 4) etiquetado de afinidad; 5) etiquetado diferencial: en el sistema cuando hay moléculas de enzimas, sustratos, inhibidores; 6) uso de la diferencia en el estado de la proteína.
8. Reactivo de afinidad: también conocido como inhibidores específicos de sitio, el reactivo actúa sobre un gen en el sitio sobre el que actúa y no interactúa con otros genes fuera del sitio sobre el que actúa, y este tipo de modificador se denomina reactivo de afinidad.
9. Marcado por afinidad: los reactivos de afinidad suelen tener una estructura similar al sustrato, el sitio activo de la enzima tiene un alto grado de afinidad por el sitio activo de los residuos de aminoácidos que pueden marcarse covalentemente, este tipo de modificación química de la especificidad del marcado por afinidad, también conocida como especificidad de inhibición irreversible.
10. Enzima inmovilizada: en un espacio determinado, en estado cerrado, puede producirse una acción continua y, finalmente, reciclarse.
11. Cómo afecta la inmovilización a la estabilidad de la enzima a través de los tres efectos siguientes: 1) crea una barrera espacial; 2) crea una restricción de difusión; 3) enlace covalente multipunto.
12. Métodos de estabilización:
(i) inmovilización (unión química, método de incrustación, etc.): 1) generación de barreras espaciales: inhibición de la inactivación química; 2) generación de limitación de la difusión: incrustación de la enzima dentro de las partículas porosas, donde el sustrato entra en contacto con la superficie de las partículas porosas antes de difundirse hacia el interior para interactuar con la enzima, sin control por la concentración del sustrato; 3) enlace covalente multipunto: unir la enzima de forma multipunto y covalente a la superficie del portador, o reticular la enzima con un reactivo bifuncional o bajar la enzima para encapsularla en el portador. El poro estrecho puede hacer que la conformación de la enzima sea más sólida, evitando así que la conformación de la enzima pase del estado plegado al estado estirado en exceso.
13. Ribonucleasa: Es una descripción del ARN con actividad catalítica, cuya naturaleza química es que el ácido ribonucleico tiene la función catalítica de una enzima, y el sustrato puede ser una molécula diferente o algunas partes de la misma molécula de ARN.
14. Nucleasas naturales: (a) nucleasas de tipo cizalla (catalizan el corte del ARN propio y heterogéneo, endonucleasa de ácido nucleico): 1) nucleasa de tipo martillo; 2) nucleasa de tipo horquilla; 3) enzima compleja proteína-ARN; (b) nucleasa de tipo empalme: incluyendo intrón del grupo Ⅰ e intrón del grupo Ⅱ; para lograr el autoempalme del ARN; con la actividad de endonucleasa y ligasa de ácido nucleico.
15. Selección in vitro: a partir de una biblioteca molecular aleatoria de gran capacidad construida a partir de moléculas de ARN o ADN ordenadas aleatoriamente, en la que se selecciona un número muy pequeño de moléculas con funciones específicas.
16. Aptámero: los fragmentos de ARN o ADN que pueden unirse específica y eficientemente a ligandos como sustancias orgánicas o proteínas se denominan aptámeros de ARN o aptámeros de ADN, respectivamente.
17. Programa de cribado de aptámeros: 1) sintetizar químicamente una biblioteca de moléculas de ADN, en una posición de la cadena molecular para introducir un orden completamente aleatorio o parcialmente mutado, los extremos de la molécula son un orden fijo, con el fin de realizar la amplificación por PCR; 2) después de unas cuantas rondas de amplificación por PCR, transcripción in vitro para formar una biblioteca de ARN ordenado aleatoriamente; 3) estas moléculas de ARN a través de la combinación de moléculas diana en columnas de cromatografía de afinidad, según el tamaño de la capacidad de unión del ARN y la molécula diana se distinguirán, las moléculas de ARN de unión fuerte se eluyeron finalmente; 4) moléculas de ARN eluidas después de la transcripción inversa, amplificación por PCR, transcripción, en el siguiente ciclo de cribado, después de 5 a 10 ciclos, para obtener la biblioteca enriquecida con moléculas diana con alta afinidad de moléculas de ARN.
18. Proceso de cribado de nucleasas: 1) transcribiendo una secuencia aleatoria de ARN para construir una biblioteca aleatoria de ADN; 2) biblioteca aleatoria con moléculas de actividad catalítica que pueden catalizar el sustrato y llevar a cabo la ligación covalente; 3) el producto de la reacción a través del extremo 5′ del ARN inmovilizado en el sustrato del apareamiento complementario secuencial de columnas de afinidad de oligonucleótidos, adsorción selectiva de la biblioteca aleatoria de aquellos que pueden catalizar las moléculas de ARN en la reacción de ligación; 4) Después de la elución con alta concentración de sal: transcripción inversa, amplificación por PCR, transcripción y entrada en la siguiente ronda de cribado; 5) En el siguiente ciclo de cribado, se introducen mutaciones en las moléculas activas con una cierta frecuencia mediante PCR propensa a errores, lo que aumenta la poliselectividad molecular de la biblioteca aleatoria obtenida por cribado; 6) Después de varias rondas de cribado, se enriquecen las moléculas de ARN con actividad catalítica y se eliminan las moléculas relativamente menos activas.
19. Desoxirribonucleasa: fragmento de ADN monocatenario con función catalítica sintetizado mediante técnicas de evolución molecular in vitro que tiene una actividad catalítica y un reconocimiento de estructuras eficientes.
1. Método de selección in vitro: 1) sintetizar moléculas de ADN artificialmente sin transcripción ni transcripción inversa, y llevar a cabo directamente la amplificación por PCR; 2) obtener moléculas de ADN monocatenario: La amplificación por PCR conecta una biotina al cebador, y el producto de la PCR pasa a través de la columna de afinidad de la proteína biotina para realizar la separación de las cadenas positivas y negativas; 3) introducir iones metálicos divalentes como cofactores; 4) introducir algunos grupos funcionales adicionales en el ADN para dirigirse a estas desoxirribonucleasas. grupos funcionales adicionales en el ADN para aumentar la afinidad estructural y funcional.
2. Clasificación de las desoxirribonucleasas: (desoxirribonucleasas que escinden el ARN) (desoxirribonucleasas que escinden el ADN) (desoxirribonucleasas con actividad cinasa) (desoxirribonucleasas con función ligasa) (catalizan la reacción de quelación de metal ciclohexil porfirina)
3. Ácido nucleico antisentido: molécula de ADN o ARN que se une a una molécula de ARNm, formando una barrera espacial que impide que se una al ribosoma y, por tanto, que se traduzca en una proteína, además de degradar el ARNm.
4. Diseño racional de moléculas enzimáticas: estudio de enzimas naturales o mutabilidad real utilizando diversos métodos de bioquímica, cristalografía, espectroscopia, etc. para obtener características moleculares enzimáticas. Estructura espacial. La relación entre estructura y función, así como los residuos de aminoácidos y otra información, y luego utilizar esto como base para la modificación enzimática.
5. Diseño no racional de la molécula enzimática: sin necesidad de información precisa sobre la estructura de la molécula enzimática, la molécula enzimática se transforma mediante mutación aleatoria, recombinación genética, cribado en blanco y otros métodos, y la enzima mutante de la naturaleza requerida se selecciona de forma dirigida.
6. Evolución dirigida de la molécula enzimática: es decir, la dirección de desarrollo de la molécula enzimática; consiste en partir de una o más enzimas parentales existentes (naturales u obtenidas artificialmente), construir una biblioteca de enzimas mutantes artificiales mediante mutación o recombinación de genes y, en última instancia, obtener la enzima evolucionada con ciertas características de las expectativas principales mediante cribado. Evolución dirigida = mutación aleatoria + recombinación directa + selección (o cribado).
7. PCR propensa a errores: Cuando se utiliza la enzima Taq para la amplificación por PCR del gen diana, la frecuencia de mutación de la enzima Taq se modifica ajustando las condiciones de reacción, como aumentar la concentración de Mg2+, añadir iones Mn, cambiar la concentración de dNTP en el sistema, etc., para introducir aleatoriamente mutaciones en el gen diana con una cierta frecuencia para construir una biblioteca de mutaciones, y luego seleccionar o cribar los mutantes requeridos.
8. PCR continua propensa a errores: genes mutados útiles obtenidos de una amplificación por PCR como plantillas para la siguiente amplificación por PCR, y llevar a cabo mutagénesis aleatoria de forma continua y repetida, de modo que las pequeñas mutaciones se acumulen después de cada vez y produzcan importantes mutaciones intencionales.
9. Reorganización del ADN: combinar las mutaciones positivas que se han obtenido en diferentes genes para formar un nuevo conjunto de genes mutantes, también conocido como PCR sexual.
10. Operación de reorganización del ADN: los fragmentos de ADN aislados del conjunto de genes de mutación positiva se cortan aleatoriamente con desoxirribonucleasa Ⅰ para obtener fragmentos aleatorios, después de varios ciclos de PCR sin cebadores, en el proceso del ciclo de PCR, los fragmentos aleatorios se utilizan como plantillas y cebadores de cada uno para la amplificación, hasta que se obtienen los genes de longitud completa, lo que conduce a la recombinación entre fragmentos de diferentes genes, y a la recombinación de mutaciones intencionales en los padres. Realizar la recombinación.

11. Método de extensión escalonada: En la reacción de PCR, el recocido y la extensión convencionales se combinan en un solo paso y su tiempo de reacción se acorta considerablemente, de modo que solo se puede sintetizar una cadena naciente muy corta. La cadena naciente desnaturalizada se utiliza entonces como cebador para recocer con diferentes plantillas que están presentes simultáneamente en el sistema mientras continúa la extensión. Este proceso se repite hasta que se produce un fragmento de gen de longitud completa, lo que da como resultado moléculas de ADN naciente espaciadas que contienen diferentes secuencias de plantilla. Estas moléculas de ADN naciente contienen un gran número de combinaciones de mutaciones que facilitarán la generación de nuevas propiedades enzimáticas.
12. Biblioteca de genes: ADN genómico de un organismo parcialmente digerido con endonucleasa de restricción, la sección de la enzima se insertará en las moléculas de ADN portadoras, todas las moléculas portadoras insertadas en los fragmentos de ADN genómico de la colección de moléculas portadoras contendrán todo el genoma de este organismo, que también constituye la biblioteca de genes del organismo.
13. Representatividad de la biblioteca: si las moléculas de ADN contenidas en la biblioteca pueden reflejar completamente todos los posibles cambios y alteraciones de los genes exógenos, lo cual es el indicador más importante de la calidad de la biblioteca. Es el indicador más importante de la calidad de la biblioteca. El indicador de la representatividad de la biblioteca es la capacidad de biblioteca de la biblioteca.
14. Capacidad de biblioteca: se refiere al número de clones recombinantes independientes contenidos en la biblioteca de mutaciones original construida.
15. Vectores para la construcción de bibliotecas de mutaciones: (sistema de vectores de fagos λ) (sistema de vectores de plásmidos) (sistema de vectores de expresión de células de mamíferos).
16. Mimética enzimática: También conocida como enzima artificial o modelo enzimático, es una ciencia aplicada que imita la forma y el tamaño del sitio activo de la enzima y su microambiente y otras características estructurales, así como el mecanismo de acción y la estereoquímica de la enzima a nivel molecular.
17. El (grupo catalítico) y el (sustrato) del modelo enzimático deben tener características estereoquímicas que coincidan entre sí, lo cual es muy importante para la formación de una buena especificidad de reacción y potencia catalítica.
18. Química «sujeto-invitado»: El campo de la química en el que el sujeto (enzima) y el invitado (sustrato) forman complejos estables a través de ligandos y otros enlaces secundarios se denomina química «sujeto-invitado».
19. Clasificación de las enzimas simuladas: (a) según el tipo: 1) modelos enzimáticos simples; 2) modelos enzimáticos mecanicistas; 3) compuestos sintéticos simples similares a las enzimas; (b) según las propiedades: 1) modelos enzimáticos sujeto-invitado; 2) modelos enzimáticos micelares; 3) peptidasas; 4) enzimas semisintéticas; 5) enzimas de impresión molecular; 6) enzimas anticuerpo.
20. Enzima anticuerpo: producto de la alta selectividad del anticuerpo y la alta capacidad catalítica eficiente de la enzima, la esencia es una clase de inmunoglobulina con capacidad catalítica, también conocida como anticuerpo catalítico, la especificidad excede la velocidad catalítica de la especificidad de la reacción enzimática, y algunos de ellos pueden alcanzar también la velocidad catalítica de la enzima.
21. Impresión molecular: proceso de preparación de un polímero que es selectivo para un compuesto, el compuesto se denomina molécula impresa, también llamada molécula plantilla.
22. Principio de la impresión molecular (método de preparación de la impresión molecular): 1) seleccionar el monómero funcional de la molécula impresa, de modo que los dos tengan una reacción complementaria; 2) en la molécula impresa, los complejos de monómeros alrededor de la reacción de polimerización; 3) eliminar la molécula impresa del polímero mediante extracción; 4) la formación de un polímero retenido dentro de la molécula impresa con exactamente la misma forma, tamaño de la cavidad, el polímero puede ser altamente selectivo para volver a unir las moléculas impresas con alta selectividad.
23. Tipos de impresión molecular superficial: 1) impresión molecular en la superficie de materiales inorgánicos como portadores; 2) modificación superficial de materiales sólidos; 3) impresión superficial de proteínas.
24. Bioimpresión: un tipo de impresión molecular, se refiere a los materiales biológicos naturales (como proteínas y sacáridos) como esqueleto, sobre el que se imprime molecularmente, y al proceso de generación de las moléculas impresas con reconocimiento específico de la cavidad.
25. Principio de bioimpresión: la flexibilidad de la conformación de las biomoléculas se anula en la fase orgánica anhidra, y sus conformaciones se fijan, por lo que los cambios conformacionales producidos por la interacción entre la molécula plantilla y la biomolécula en la solución acuosa solo pueden conservarse cuando se trasladan a la fase orgánica anhidra.
26. Conversión de proteínas en enzimas semisintéticas mediante bioimpresión: 1) Desnaturalización parcial de la proteína para alterar la conformación de la proteína de partida; 2) Adición de la molécula impresa para que la molécula impresa se una completamente a la proteína parcialmente deformada; 3) Después de la interacción de la molécula impresa con la proteína, reticulación de la proteína impresa con el agente reticulante; 4) Eliminación de la molécula impresa por diálisis.

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